細胞器分離方法(用什么方法分離細胞器)

1.用什么方法分離細胞器

細胞器的分離主要用到的是離心技術(shù)。

主要用到：（一）、差速離心（differential centrifugation）在密度均一的介質(zhì)中由低速到高速逐級離心，用于分離不同大小的細胞和細胞器。在差速離心中細胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、最后為核蛋白體。

由于各種細胞器在大小和密度上相互重疊，而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中，一般重復2~3次效果會好一些。差速離心只用于分離大小懸殊的細胞，更多用于分離細胞器。

通過差速離心可將細胞器初步分離，常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。（二）、密度梯度離心（density gradient centrifugation）用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。

這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種（圖2-23）。密度梯度離心常用的介質(zhì)為氯化銫，蔗糖和多聚蔗糖。

分離活細胞的介質(zhì)要求：1）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時，粘度不高；2)PH中性或易調(diào)為中性；3）濃度大時滲透壓不大；4）對細胞無毒。