分離普通微生物有哪些(細(xì)菌的純種分離和接種技術(shù)注意事項(xiàng)有哪些)
1.細(xì)菌的純種分離和接種技術(shù)注意事項(xiàng)有哪些
細(xì)菌的純種分離和接種技術(shù)中，需要注意的事項(xiàng)有：
1）稀釋度的問(wèn)題
純種分離的時(shí)候，無(wú)非是把菌液稀釋一定梯度后，涂布在諸如LB培養(yǎng)基上。如果沒(méi)有稀釋好，就會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌長(zhǎng)得太密，或者是細(xì)菌根本不長(zhǎng)。最優(yōu)的稀釋梯度是最后在平板上的菌落數(shù)在30至300之間。此時(shí)，能清楚地看清菌落的形態(tài)，便于挑取單菌落；
2）雜菌污染的問(wèn)題
因?yàn)橛糜诮臃N的一般都是營(yíng)養(yǎng)豐富的有機(jī)培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基適合任何細(xì)菌生長(zhǎng)。在操作過(guò)程中，空氣和桌面上都會(huì)有大量看不見(jiàn)的細(xì)菌潛在。在分離和接種前，所有用到的器具和培養(yǎng)基必須在121攝氏度下滅菌20分鐘至30分鐘。在倒平板時(shí)，最好在培養(yǎng)基還是熱的時(shí)候倒，以減少雜菌感染。所有的操作最好在超凈工作臺(tái)上完成。若沒(méi)有超凈工作臺(tái)，那就拿兩個(gè)酒精燈點(diǎn)燃，并用酒精擦拭桌面，在兩個(gè)酒精燈之間操作。
綜上，想要較好地分離和接種細(xì)菌，操作人員必須完全保證雜菌的感染，操作熟練，在溫度和潔凈度上做到最嚴(yán)格。
2.進(jìn)行菌種分離前需要做哪些準(zhǔn)備工作?
具體如下：（1） 無(wú)菌室和分離用器具的滅菌和消毒分離菌種的操作過(guò) 程，應(yīng)該在很清潔的條件下嚴(yán)格按照無(wú)菌操作技術(shù)進(jìn)行，無(wú)菌室、無(wú)菌箱或潔凈工作臺(tái)都應(yīng)保持清潔，必要時(shí)可用0。
1%的升汞溶液 或70%的乙醇擦拭工作臺(tái)。微生物一般都是附著在塵埃上、懸浮 于空氣中，可采用在室內(nèi)噴霧或煮沸水的方法，使空氣中水汽飽和，塵埃與水滴同時(shí)降落，除去空氣中的微生物。
分離時(shí)所用的培養(yǎng)皿、刀剪、接種環(huán)等用具及工作人員的工作服都應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌處理，操作時(shí)不能在操作間走動(dòng)，防止帶來(lái)雜菌。（2） 消毒液的配制① 無(wú)菌水：無(wú)菌水即為高壓滅菌后的自來(lái)水。
將適量自來(lái)水裝人三角瓶中，塞好棉塞，然后進(jìn)行髙壓滅菌，水裝人量不宜太多，防止高壓滅菌時(shí)弄濕棉塞。 無(wú)菌水不應(yīng)保存時(shí)間太久，防止污染。
② 常用的消毒液有以下幾種：0。1%升汞溶液、漂白粉、70%的酒精溶液。
此外，5%福爾馬林、3%過(guò)氧化氫、0。1%氰化汞、2%高錳酸鉀、0。
1%硝酸銀等都可用作表面消毒，處理時(shí)間和濃度因材料不同而異，處理后都應(yīng)用無(wú)菌水沖洗。 （3） 排除細(xì)菌污染細(xì)菌污染是分離真菌的大敵，目前抑制細(xì)菌生長(zhǎng)有效的方法是在培養(yǎng)基中加人適當(dāng)?shù)目股亍?/p>
加金霉素（30微克/毫升）可抑制多數(shù)細(xì)菌生長(zhǎng)，加青霉素（2微克/毫升）可抑制革蘭陽(yáng)性細(xì)菌生長(zhǎng)，加多黏菌素B(0。5微克/毫升)可抑制革蘭陰性細(xì)菌生長(zhǎng)，加鏈霉素40微克/毫升和氯霉素50微克/毫升可以抑制大部分細(xì)菌生長(zhǎng)，除氣霉素可在制作培養(yǎng)基時(shí)滅菌前加人外，其他抗生素都應(yīng)在培養(yǎng)基滅菌后冷卻到45°C左右時(shí)再加人。
此外，可調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值，酸性培養(yǎng)基對(duì)大部分細(xì)菌都有抑制作用，而并不影響真菌生長(zhǎng)。
3.畜禽細(xì)菌分離培養(yǎng)需要注意什么
1） 嚴(yán)格的無(wú)菌操作分離培養(yǎng)時(shí)的無(wú)菌操作包括兩個(gè)方面： 一是采取待檢材料時(shí)的無(wú)菌操作，不論任何待檢材料（包括動(dòng)物的 組織、體液、分泌物、滲出物、排泄物、詞料或飲水等）必須在無(wú) 菌操作下，用滅菌的器械采取，樣品放入滅菌的容器中待檢。
二是 接種培養(yǎng)基時(shí)的無(wú)菌操作，接種用的器械如接種環(huán)、棉棒或其他用 具，在取材料接種之前必須予以滅菌，接種培養(yǎng)基時(shí)，要盡一切可 能防止外界微生物的進(jìn)人。 2） 創(chuàng)造適合細(xì)菌生長(zhǎng)發(fā)育的條件一是選擇適宜的培養(yǎng)基， 一般盡可能地多用幾種培養(yǎng)基，包括普通培養(yǎng)基和特殊培養(yǎng)基（如 含有特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基、適于厭氧菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基等）。
二是 要考慮細(xì)菌所需的大氣條件。對(duì)于性質(zhì)不明的細(xì)菌材料最好多接種 幾份培養(yǎng)基，分別放在普通大氣、無(wú)氧環(huán)境內(nèi)或含有5%?10%二 氧化碳的容器中培養(yǎng)。
三是要考慮培養(yǎng)溫度和時(shí)間。一般病原菌放 在37度下培養(yǎng)即可，經(jīng)24?72小時(shí)培養(yǎng)后大多數(shù)病原菌都可以生 長(zhǎng)出來(lái)，少數(shù)須培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間（1?4周）后可見(jiàn)其生長(zhǎng)，但要注意 防止培養(yǎng)基變干。
