分選抗體的方法(抗體的制備方法)

1.抗體的制備方法有哪些

直接法 1.檢查抗原法 這是最早的方法，用已知特異性抗體與熒光素結(jié)合，制成熒光特異性抗體，直接與細(xì)胞或組織中相應(yīng)抗原結(jié)合，在熒光顯微鏡下即可見抗原存在部位呈現(xiàn)特異性熒光。

此法很特異和簡(jiǎn)便，但一種熒光抗體只能檢查一種抗原，敏感性較差。 2.檢查抗體法 將抗原標(biāo)記上熒光素，即為熒光抗原，用此熒光抗原與細(xì)胞或組織內(nèi)相應(yīng)抗體反應(yīng)，而將抗體定位檢測(cè)出來(lái)。

生物幫上面有的， 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，植物細(xì)胞培養(yǎng)，ES細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞）培養(yǎng)，細(xì)胞懸浮培養(yǎng)，貼壁細(xì)胞培養(yǎng)。

2.單克隆抗體中兩次篩選分別是什么方法

第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，用連續(xù)注射抗原，下面具體介紹一下：

1、在實(shí)際免疫過(guò)程中，由于采用連續(xù)注射抗原的方法，且一種抗原決定簇刺激機(jī)體形成相對(duì)應(yīng)的一種效應(yīng)B淋巴細(xì)胞，因此，從小鼠脾臟中取出的效應(yīng)B淋巴細(xì)胞的特異性是不同的，經(jīng)HAT培養(yǎng)液篩選的雜交瘤細(xì)胞特異性也存在差異，所以必須從雜交瘤細(xì)胞群中篩選出能產(chǎn)生針對(duì)某一預(yù)定抗原快定簇的特異性雜交瘤細(xì)胞；

2、通常采用有限稀釋克隆細(xì)胞的方法，將雜交瘤細(xì)胞多倍稀釋，接種在多孔的細(xì)胞培養(yǎng)板上，使每一孔含一個(gè)或幾個(gè)雜交瘤細(xì)胞（理論上30%的孔中細(xì)胞數(shù)為0時(shí)，才能保證有些孔中是單個(gè)細(xì)胞），再由這些單細(xì)胞克隆生長(zhǎng)，最終選出分泌預(yù)定特異抗體的雜交細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

拓展資料：

單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無(wú)限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。

參考資料：?jiǎn)慰寺】贵w百度百科：網(wǎng)頁(yè)鏈接

3.自身抗體的檢測(cè)方法有哪些

檢測(cè)自身抗體的方法有多種，包括間接免疫熒光法、顆粒凝集法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、放射免疫法、免疫雙擴(kuò)散法、參比對(duì)流免疫電泳法、免疫印跡法、免疫斑點(diǎn)法、膠體金標(biāo)斑點(diǎn)免疫滲濾法以及速率免疫比濁法等，間接免疫熒光法即適用于檢測(cè)針對(duì)原位成分也適用于可溶性成分的抗體，其余各法均適用于針對(duì)可溶性成分的抗體，可根據(jù)臨床需要及醫(yī)院條件去選用。

以下介紹常用的幾種。 （1）間接免疫熒光法（IIF）這是進(jìn)行抗核抗體、抗核仁抗體和抗胞漿抗體篩選檢測(cè)的最有效方法。

在些檢測(cè)系統(tǒng)中，以組織培養(yǎng)細(xì)胞和器官的冷凍片切為反應(yīng)底物。 （2）免疫雙擴(kuò)散法（ID）免疫雙擴(kuò)散法過(guò)去稱為“Ouchterlony試驗(yàn)”是最早用于鑒定系統(tǒng)性自身免疫性疾病中自身抗體特異性的檢測(cè)系統(tǒng)。

在這些系統(tǒng)中，瓊脂凝膠是血清中抗體擴(kuò)散從相反方向擴(kuò)散過(guò)來(lái)的抗原相遇的介質(zhì)，在抗原與抗體間形成沉淀線。鑒定抗原抗體系統(tǒng)時(shí)需標(biāo)準(zhǔn)參照血清。

當(dāng)二者相同時(shí)，兩條沉淀線在瓊脂凝膠上形成一條連續(xù)的沉淀線。免疫擴(kuò)散中形成的沉淀線可用來(lái)鑒定如抗Sm、RNP、SS-B抗體系統(tǒng)及許多前述的可沉淀性抗原抗體系統(tǒng)。

（3）對(duì)流免疫電泳（CIE）對(duì)流免疫電泳是免疫擴(kuò)散的改良試驗(yàn)，采用電泳以加速抗原、抗體彼此向?qū)Ψ揭苿?dòng)的速度，從而僅在幾小時(shí)內(nèi)便可形成沉淀線，而免疫雙擴(kuò)散法則需1~2天的時(shí)間。在CIE中僅能檢出與抗原相比為酸性等電點(diǎn)的抗體，但對(duì)流免疫電泳很易檢出抗DNA、Sm、RNP和SS-B的自身抗體。

（4）免疫印跡法免疫印跡法（Westernblotting,WB）已廣泛用于測(cè)定自身抗體。在免疫印跡法中，將抗原電泳入聚丙烯酰胺凝膠，蛋白在電泳池中移動(dòng)的速度與其相對(duì)分子大小成比例。

許多核內(nèi)、核仁內(nèi)和胞漿抗原可根據(jù)它們?cè)谠撓到y(tǒng)中的相對(duì)移動(dòng)速度進(jìn)行測(cè)定。與已知分子大小蛋白帶發(fā)生反應(yīng)的抗體特異性可據(jù)此初步作出判斷。

（5）ELISA這一抗體檢測(cè)系統(tǒng)十分敏感，但卻非常依賴于抗原制品的純度。通常以部分純化的組織提取物或部分純化的重組抗原為底物。

抗體與這些抗原發(fā)生反應(yīng)后，加入能結(jié)合抗體濃度的指示劑。該系統(tǒng)存在兩個(gè)問題，一個(gè)問題是部分純化組織提取物中含有一種以上的抗原或重組抗原，這些抗原可含有細(xì)菌產(chǎn)物（所檢測(cè)的血清可能含有針對(duì)這些細(xì)菌產(chǎn)物的抗體）。

另一個(gè)問題是隨著ELISA的敏感性增高，其特異性隨之降低。