組織常用固定方法(組織和細(xì)胞的固定的方法)

1.組織和細(xì)胞的固定的方法有哪些

組織和細(xì)胞的固定的方法，浸潤(rùn)法

浸潤(rùn)法是組織化學(xué)和免疫

組織化學(xué)常用的固定方法，一次要處理許多組織樣品時(shí)也多用此法。

預(yù)先需估計(jì)固定劑的用量，并在取材前配好固定液，分裝于小容器內(nèi)，在容器上標(biāo)記組別和取材時(shí)間。容器內(nèi)放人記錄組織類型的紙條，以便包埋時(shí)辨認(rèn)。固定液的用量應(yīng)是樣品的40倍，以保證組織充分固定。固定時(shí)間可根據(jù)所選固定液和組織類型而定。

若進(jìn)行酶組織化學(xué)染色，應(yīng)在4℃短時(shí)間固定，固定時(shí)間長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致酶活性減弱，甚至消失。

可以到生物幫詳細(xì)的了解下，干細(xì)胞專用培養(yǎng)基

2.組織和細(xì)胞的固定用什么方法

灌流固定法

此法是經(jīng)血管途徑，將固定液灌注到欲固定的器官內(nèi)，使生活的細(xì)胞在原位及時(shí)迅速固定，取下組織之后再浸入相同的固定液內(nèi)繼續(xù)固定。

灌流固定時(shí)大動(dòng)物多采用輸液方式，將固定液從一側(cè)頸總動(dòng)脈或股動(dòng)脈輸入，從另一側(cè)切開(kāi)靜脈放血，輸入固定液與放血同時(shí)進(jìn)行。固定液的輸人量因個(gè)體不同而異，即500―2000ml不等。

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3.最常用到的幾種組織固定液

(1)中性緩沖甲醛。

該液能夠固定大多數(shù)組織結(jié)構(gòu)，對(duì)脂類有較好的固定效果。免疫組化、原位雜交等試驗(yàn)都可以使用。

本液還可以長(zhǎng)時(shí)間存放，是實(shí)驗(yàn)室常備的固定液之一。固定液浸透較慢，固定時(shí)間不限，浸透之后可以長(zhǎng)時(shí)間存放（免疫組化和原位雜交標(biāo)本建議不要這么做）。

美中不足是染色時(shí)酸性染料著色不佳，并且本液對(duì)糖類沒(méi)有固定作用。 （2）AAF。

該液由醋酸（A）、酒精（A）和甲醛（F）為主要成分，廣泛用于動(dòng)植物組織的固定和各種實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，植物固定則是首選。固定液滲透均一，速度很快。

固定時(shí)間一般為4 ~ 24 h。此液處理后，染色結(jié)果細(xì)膩，但酸性染料著色力下降。

本液配制后可以短時(shí)間放置。 （3）Bouin。

過(guò)去常用的一種固定液，主要用于軟化皮膚或者富含結(jié)締組織的標(biāo)本，在胚胎標(biāo)本處理中使用很廣。用本液處理后，酸性染料著色鮮艷。

但是，由于含有苦味酸，不能用于原位雜交等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。此外，本液對(duì)很多細(xì)胞器的破壞較大，尤其不適于固定腎臟標(biāo)本。

經(jīng)本液固定的標(biāo)本，尺寸應(yīng)盡可能小，否則內(nèi)外固定的效果有所差別。本液可以較長(zhǎng)時(shí)間存放，但標(biāo)本在其中不應(yīng)久存，固定8 ~ 24 h為宜。

（4）Zamboni。用于免疫組化和免疫電鏡的首選固定液。

保存細(xì)微結(jié)構(gòu)和抗原特性最好的固定液之一。固定液浸透速度較慢，要求標(biāo)本不能過(guò)大，常用于血管灌注。

該液可以長(zhǎng)時(shí)間存放，標(biāo)本在其中也可以保存較長(zhǎng)時(shí)間，抗原封閉作用相對(duì)較弱。由于含有苦味酸，故不用于原位雜交試驗(yàn)。

（5）Helly,Susa,Zenker。這是三種比較相近的固定液，含有汞鹽和重鉻酸鉀。

經(jīng)這類固定液處理，標(biāo)本對(duì)酸性和堿性染料均有較好的親和能力。染色處理前需要脫汞和脫碘操作。

目前除了幾種傳統(tǒng)染色更鮮艷外，并無(wú)其他優(yōu)勢(shì)。

4.固定有哪些方法

(1) 外固定：常用方法有小夾板固定或石膏繃帶固定。

①小夾板 固定：主要適用于四肢長(zhǎng)骨的較穩(wěn)定骨折，固定范圍不包括骨折處的上 下關(guān)節(jié)，利于早期功能鍛煉。但偶有固定不牢的可能，易使骨折移位、不愈合、畸形愈合，若捆扎過(guò)緊影響肢體血運(yùn)、發(fā)生遠(yuǎn)端缺血。

②石膏 繃帶固定：可按肢體形狀塑形，干固后固定可靠，固定范圍大，不易發(fā)生 再移位，但不利于功能鍛煉。 （2） 持續(xù)牽引固定：皮牽引和骨牽引。

骨牽引較直接且力量大，利 于開(kāi)放性傷口觀察及換藥，利于功能鍛煉，但不能早期下床活動(dòng)；皮牽 引較間接且力量小，多應(yīng)用于兒童及股骨近端骨折的患者。 （3） 內(nèi)固定：復(fù)位準(zhǔn)確且固定牢靠但具有創(chuàng)傷。

內(nèi)固定器材有多 種，常用的有金屬絲、接骨板、螺絲釘、髓內(nèi)釘、加壓鋼板等。

5.幾種細(xì)胞固定方法

選擇最佳固定液標(biāo)準(zhǔn)是：

(1)最好地保持細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)；

(2)最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金屬的固定液在免疫組化和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中是禁用的；

(3)不要用可能帶有自發(fā)熒光的固定劑，如帶有苦味酸的固定劑，還有甲醛升汞固定液，會(huì)使上皮細(xì)胞產(chǎn)生非特異性熒光；

(4)固定劑的選擇、固定時(shí)間、溫度和PH值都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

單純固定液（1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的，其固定效果及對(duì)組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處，保存時(shí)間不超過(guò)一個(gè)月。

甲醛（40%） 100ml

無(wú)水磷酸氫二鈉 6.5g

磷酸二氫鈉 4.0g

蒸餾水 900ml

(2)乙醇固定液：使用時(shí)以80%-95%的濃度為宜，具有硬化、固定、脫水等作用，對(duì)組織滲透力較弱，因此很少單獨(dú)使用，但其保存組織中的核酸強(qiáng)于中性甲醛，故常用于有核酸操作的實(shí)驗(yàn)或檢查，假如用于證實(shí)尿酸結(jié)晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定組織。

(3)4%多聚甲醛固定液：主要用于培養(yǎng)細(xì)胞的固定。

混合固定液（1）乙醇-甲醛（乙醇-福爾馬林，AF）固定液：適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用，固定后的標(biāo)本可直接入95%乙醇脫水。

甲醛（40%） 100ml

95%乙醇 900ml

(2)B5（醋酸鈉-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴組織。染色前應(yīng)進(jìn)行脫汞沉淀處理。

無(wú)水醋酸鈉 1.25g升汞 6.0g蒸餾水 90ml

使用前加入甲醛 10ml

(3)Bouin固定液：非凡適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對(duì)組織固定較均勻，收縮很少，不會(huì)使組織變硬變脆。需現(xiàn)配現(xiàn)用。

飽和苦味酸水溶液（約1.22%） 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml(4)Carnoy固定液：穿透能力強(qiáng)，可很好的固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，非凡適用于固定外膜致密的組織，也適用于糖原及尼氏小體的固定。

無(wú)水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml

(5) Zenker固定液：經(jīng)此液固定的標(biāo)本，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)染色頗為清楚，但成本較高且需非凡處理汞。該固定液要避免接觸陽(yáng)光，以免引起化學(xué)變化而失效。

升汞 5.0g

重鉻酸鉀 2.5g

蒸餾水（加至） 100ml

6.組織施工的方式有哪些

答：考慮工程項(xiàng)目的施工特點(diǎn)、工藝流程、資源利用、平面或空間布置等要求，其施工可以采用依次、平行、流水等組織方式。

（1）依次施工方式具有以下特點(diǎn)： 1）沒(méi)有充分地利用工作面進(jìn)行施工，工期長(zhǎng)； 2）如果按專業(yè)成立工作隊(duì)，則各專業(yè)隊(duì)不能連續(xù)作業(yè)，有時(shí)間間歇，勞動(dòng)力及施工機(jī)具等資源無(wú)法均衡使用； 3）如果由一個(gè)工作隊(duì)完成全部施工任務(wù)，則不能實(shí)現(xiàn)專業(yè)化施工，不利于提高勞動(dòng)生產(chǎn)率和工程質(zhì)量； 4）單位時(shí)間內(nèi)投入的勞動(dòng)力、施工機(jī)具、材料等資源量較少，有利于資源供應(yīng)的組織； 5）施工現(xiàn)場(chǎng)的組織、管理比較簡(jiǎn)單。 （2）平行施工方式具有以下特點(diǎn)： 1）充分地利用工作面進(jìn)行施工，工期短； 2）如果每一個(gè)施工對(duì)象均按專業(yè)成立工作隊(duì)，則各專業(yè)隊(duì)不能連續(xù)作業(yè)，勞動(dòng)力及施工機(jī)具等資源無(wú)法均衡使用； 3）如果由一個(gè)工作隊(duì)完成一個(gè)施工對(duì)象的全部施工任務(wù)，則不能實(shí)現(xiàn)專業(yè)化施工，不利于提高勞動(dòng)生產(chǎn)率和工程質(zhì)量； 4）單位時(shí)間內(nèi)投入的勞動(dòng)力、施工機(jī)具、材料等資源量成倍地增加，不利于資源供應(yīng)的組織； 5）施工現(xiàn)場(chǎng)的組織、管理比較復(fù)雜。

（3）流水施工方式具有以下特點(diǎn)： 1）盡可能地利用工作面進(jìn)行施工，工期比較短； 2）各工作隊(duì)實(shí)現(xiàn)了專業(yè)化施工，有利于提高技術(shù)水平和勞動(dòng)生產(chǎn)率，也有利于提高工程質(zhì)量； 3）專業(yè)工作隊(duì)能夠連續(xù)施工，同時(shí)使相鄰專業(yè)隊(duì)的開(kāi)工時(shí)間能夠最大限度地搭接； 4）單位時(shí)間內(nèi)投入的勞動(dòng)力、施工機(jī)具、材料等資源量較為均衡，有利于資源供應(yīng)的組織；。

7.組織部門(mén)劃分的常見(jiàn)方法有那些,并對(duì)每種方法進(jìn)行說(shuō)明

部門(mén)劃分，亦稱為部門(mén)化，是對(duì)完成組織目標(biāo)所必須開(kāi)展的各項(xiàng)活動(dòng)，按照一定的方式加以歸并組合，以形成便于管理的單位或部門(mén)。

部門(mén)劃分的基本方法有如下幾種： （1）按職能劃分部門(mén) 這是應(yīng)用最廣泛的一種部門(mén)劃分方法，幾乎可以在所有類型組織的結(jié)構(gòu)中找到它的蹤跡。任何一個(gè)企事業(yè)組織存在的目的都是要?jiǎng)?chuàng)造某種為他人所需要的物品或勞務(wù)，所以，諸如制造（創(chuàng)造或增加物品或勞務(wù)的效用）、銷售（尋找愿意按一定價(jià)格購(gòu)買(mǎi)物品或接受服務(wù)的顧客）、財(cái)務(wù)（資金的籌措、保管和運(yùn)作）等，可以說(shuō)是所有的企事業(yè)組織的基本職能。

以這些基本職能為依據(jù)，便可以將組織劃分為生產(chǎn)部門(mén)、銷售部門(mén)、財(cái)務(wù)部門(mén)等。當(dāng)然，由于各種組織的活動(dòng)領(lǐng)域以及同一職能在不同組織中的重要程度不同等原因，現(xiàn)實(shí)中這些職能部門(mén)在不同類型的組織中會(huì)有不同的具體名稱。

按照職能劃分部門(mén)的好處是：第一，有利于確保組織的主要基本活動(dòng)得到重視；第二，由于遵循了專業(yè)化原則，有利于提高人員使用的效率，同時(shí)也簡(jiǎn)化了培訓(xùn)工作；第三，由于最高主管要對(duì)最終成果負(fù)責(zé)，從而為高層實(shí)施嚴(yán)格控制提供了手段。 這種劃分部門(mén)方式的缺點(diǎn)在于，它容易使人們過(guò)度局限于自己所在的職能部門(mén)而忽視組織整體目標(biāo)，部門(mén)間的協(xié)調(diào)比較困難；只有最高主管才能對(duì)最終成果負(fù)責(zé)，因而對(duì)各部門(mén)的績(jī)效和責(zé)任很難進(jìn)行評(píng)價(jià)，也不利于培養(yǎng)綜合全面的管理人才。

（2）按產(chǎn)品劃分部門(mén) 這是許多開(kāi)展多角化經(jīng)營(yíng)的大企業(yè)經(jīng)常采用的部門(mén)劃分方式。它實(shí)際上是從按照職能劃分部門(mén)的企業(yè)中逐步發(fā)展起來(lái)的。

因?yàn)殡S著企業(yè)規(guī)模的擴(kuò)大和產(chǎn)品品種的增加，管理工作變得越來(lái)越復(fù)雜，各部門(mén)主管者的工作負(fù)擔(dān)也越來(lái)越重，而管理幅度的客觀限制又使得他們難以通過(guò)增加直接下屬的辦法來(lái)解決問(wèn)題，因而，此時(shí)按照產(chǎn)品或產(chǎn)品系列來(lái)重新組織企業(yè)活動(dòng)就成為必要。在這樣的結(jié)構(gòu)安排下，組織將有關(guān)某產(chǎn)品或產(chǎn)品系列的生產(chǎn)、銷售、服務(wù)等職能活動(dòng)方面授予該產(chǎn)品分部的經(jīng)理，使他們對(duì)該產(chǎn)品經(jīng)營(yíng)的利潤(rùn)負(fù)起責(zé)任。

按照產(chǎn)品劃分部門(mén)的好處是：有利于企業(yè)采用專門(mén)設(shè)備，促進(jìn)協(xié)調(diào)，充分發(fā)揮人員的技能和專門(mén)知識(shí)，也有利于產(chǎn)品和服務(wù)的改進(jìn)和發(fā)展；能夠明確利潤(rùn)責(zé)任，便于最高主管把握各種產(chǎn)品或產(chǎn)品系列對(duì)總利潤(rùn)的貢獻(xiàn)；有利于鍛煉和培養(yǎng)獨(dú)當(dāng)一面的總經(jīng)理型的人才。 這種劃分部門(mén)方式的缺點(diǎn)主要是：它對(duì)產(chǎn)品分部主管人員的全面管理能力要求高；各產(chǎn)品分部的獨(dú)立性較強(qiáng)而整體觀念較弱；各產(chǎn)品分部?jī)?nèi)都需要保持職能部門(mén)或職能人員，從而造成資源重復(fù)配置、管理費(fèi)用增加。

（3）按地域、區(qū)域劃分部門(mén) 這是經(jīng)營(yíng)活動(dòng)在地域上比較分散的企業(yè)所常用的一種部門(mén)劃分方法。其做法是，將某一地區(qū)的業(yè)務(wù)活動(dòng)集中起來(lái)，并委派相應(yīng)的管理者，形成區(qū)域性的部門(mén)。

按照地域劃分部門(mén)，有利于鼓勵(lì)地方參與決策，促進(jìn)地區(qū)活動(dòng)的協(xié)調(diào)；有利于管理者注意當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)的需要和問(wèn)題；生產(chǎn)的當(dāng)?shù)鼗欣诮档瓦\(yùn)輸費(fèi)用，縮短交貨時(shí)間；有利于培養(yǎng)能力全面的管理者。 這種方法的主要缺點(diǎn)是，由于機(jī)構(gòu)重復(fù)，使得費(fèi)用增加，總部對(duì)地方控制的難度較大，要求管理者具有全面的管理能力。

（4）按顧客劃分部門(mén) 有許多組織按照自己所服務(wù)的顧客來(lái)劃分部門(mén)。這種方法是將與某一特定顧客有關(guān)的各種活動(dòng)結(jié)合起來(lái)，并委派相應(yīng)的管理者以形成部門(mén)。

按照顧客劃分部門(mén)的目的是為了更好的迎合特定顧客群體的要求。采用這種方法有利于重視顧客的需要，增加顧客的滿意程度，并有利于形成針對(duì)特定顧客的技能和訣竅。

不足之處主要是，按照顧客組織起來(lái)的部門(mén)常常要求特殊對(duì)待而造成部門(mén)間協(xié)調(diào)困難，管理者必須要熟悉特定顧客的情況，否則在有些情況下很難輕而易舉地對(duì)顧客進(jìn)行區(qū)分。 （5）按照技術(shù)或設(shè)備劃分部門(mén) 制造業(yè)企業(yè)中設(shè)立的焊接車(chē)間、壓力加工車(chē)間、電鍍車(chē)間，醫(yī)院的放射科、CT室等，就是按照技術(shù)或設(shè)備組織業(yè)務(wù)活動(dòng)的。

這種方法有利于充分發(fā)揮設(shè)備的能力和專業(yè)技術(shù)人員的特長(zhǎng)，便于設(shè)備維修和材料供應(yīng)。不足之處是容易強(qiáng)調(diào)局部利益而忽視整體目標(biāo)。

（6）按照時(shí)間劃分 根據(jù)時(shí)間來(lái)組織業(yè)務(wù)活動(dòng)是最古老的劃分部門(mén)的方法之一，多見(jiàn)于組織的底層。在許多組織中，由于經(jīng)濟(jì)的、技術(shù)的或其他一些原因，正常的工作日不能滿足要求，而必須采用輪班的做法。

例如，煉鋼爐、醫(yī)院的集中監(jiān)護(hù)室、消防隊(duì)等，均采用這種方法來(lái)進(jìn)行組織。采用這種方法有利于連續(xù)、不間斷地提供服務(wù)和進(jìn)行生產(chǎn)，有利于使設(shè)備、設(shè)施得到最充分的利用。

缺點(diǎn)在于夜間可能會(huì)缺乏監(jiān)督，人員容易疲勞，協(xié)調(diào)和溝通有時(shí)會(huì)比較困難。 （7）按照人數(shù)劃分 單純地按照人數(shù)來(lái)安排業(yè)務(wù)活動(dòng)是一種最原始、最簡(jiǎn)單的劃分部門(mén)的方法。

當(dāng)最終成果只是取決于總?cè)藬?shù)時(shí)，或者說(shuō)每個(gè)人的貢獻(xiàn)都是單純無(wú)差別的簡(jiǎn)單勞動(dòng)時(shí)，采用這種方法是有效的。

8.組織措施包括哪些

保證安全的組織措施和技術(shù)措施一、保證安全的組織措施一般包括：工作票制度、工作許可制度、工作監(jiān)護(hù)制度、工作間斷、轉(zhuǎn)移和終結(jié)以及恢復(fù)送電制度。

1、工作票制度工作票是準(zhǔn)許在電氣設(shè)備，熱力和機(jī)械設(shè)備以及電力線路上工作的書(shū)面命令書(shū)。（1）發(fā)電廠（變電站）第一種工作票；在發(fā)電廠或變電所高壓電氣設(shè)備上工作，需要全部或部分停電；在高壓室內(nèi)的二次接線和照明等回線上的工作，需要將高壓設(shè)備停電或做安全措施的工作。

（2）發(fā)電廠（變電站）第二種工作票；在發(fā)電廠或變電所的電氣設(shè)備上帶電作業(yè)和在帶電設(shè)備外殼上的工作，在控制盤(pán)和低壓配電盤(pán)、配電箱、電源干線上的工作；二次接線回路上工作而無(wú)需將高壓設(shè)備停電；轉(zhuǎn)動(dòng)中的發(fā)電機(jī)，同期調(diào)相機(jī)的勵(lì)磁回路或高壓電動(dòng)機(jī)轉(zhuǎn)子電阻回路上的工作；非當(dāng)班值班人員用絕緣棒和電壓互感器定相或用鉗型電流表測(cè)量高壓回路的電流。（3）電力線路第一種工作票；在停電線路（或在雙回線路中的一回停電線路）上的工作；在全部或部分停電的配電變壓器高架上或配電變壓器室內(nèi)的工作。

（4）電力線路第二種工作票；在電力線路上帶電作業(yè)；在帶電線路桿塔上工作；在運(yùn)行中的配電變壓器臺(tái)上或配電變壓器室內(nèi)的工作。（5）熱力機(jī)械工作票；（6）一級(jí)動(dòng)火票；（7）二級(jí)動(dòng)火票。

工作票所涉及人員：（1）工作票簽發(fā)人；（2）工作負(fù)責(zé)人（監(jiān)護(hù)人）；（3）工作許可人；（4）工作班成員。2、工作許可制度工作許可制度，是在完成安全措施之后，為進(jìn)一步加強(qiáng)。